講述共聚焦顯微鏡TCS SP8的操作步驟
更新時間：2018-10-22 點擊次數：1533
共聚焦顯微鏡TCS SP8包括LED光源、旋轉多針孔盤、帶有壓電驅動器的物鏡和CCD相機。LED源通過多針孔盤（MPD）和物鏡聚焦到樣品表面上，從而反射光。反射光通過MPD的針孔減小到聚焦的部分，這落在CCD相機上。來自傳統光學顯微鏡的圖像包含清晰和模糊的細節。相反，在共焦圖像中，通過多針孔盤的操作濾除模糊細節（未聚焦）。只有來自焦平面的光到達CCD相機。因此，共聚焦顯微鏡能夠在納米范圍內獲得高分辨率。每個共焦圖像是通過樣品的形貌的水平切片。在不同的焦點高度捕獲圖像產生這樣的圖像的堆疊，通過共焦顯微鏡通過壓電驅動器通過物鏡的垂直位移來實現。200到400個共焦圖像通常在幾秒內被捕獲，之后軟件從共焦圖像的堆棧重建的三維高度圖像。
共聚焦顯微鏡TCS SP8的操作步驟：
1.開啟儀器電源及光源：一般先開啟顯微鏡和激光器，再啟動計算機，然后啟動操作軟件，設置熒光樣品的激發光波長，選擇相應的濾光鏡組塊。以便光電倍增管(photo multiplier tube，PMT)檢測器能得到足夠的信號結果。使用汞燈的注意事項同普通熒光顯微鏡。
2.設置相應的掃描方式：在目視模式下．調整所用物鏡放大倍數，在熒光顯微鏡下找到需要檢測的細胞。切換到掃描模式，調整雙孔針和激光強度參數，即可得到清晰的共聚焦圖像。
3.獲取圖像：選擇合適的圖像分辨率，將樣品完整掃描后，保存圖像結果即可。
4.關閉儀器：儀器測定樣品結束后，先關閉激光器部分，計算機仍可繼續進行圖像和數據處理。若要退出整個共聚焦顯微鏡TCS SP8系統，則應該在激光器關閉后，待其冷卻至少10分鐘后再關閉計算機及總開關。
共聚焦顯微鏡TCS SP8是一項高分辨率三維光學成像技術，主要特點在于其光學分層能力，即獲得特定深度下焦點內的圖像，圖像通過逐點采集，以及之后的計算機重構而成，因此它可以重建拓撲結構復雜的物體。
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